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小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞电穿孔转染条件的建立和验证

2020年05月29日 浏览量: 评论(0) 来源:中国实验动物学报2020年第2期 作者:罗维 艾磊 周越 责任编辑:admin
摘要:筛选并验证 RAW264. 7细胞中电穿孔转染TRIB3过表达质粒和 TRIB3 siRNA的条件,建立 适用于RAW264.7细胞的最佳电穿孔转染方案。

目的  筛选并验证 RAW264. 7 细胞中电穿孔转染 TRIB3 过表达质粒和 TRIB3 siRNA 的条件,建立适用于 RAW264. 7 细胞的最佳电穿孔转染方案。 


方法  通过改变脉冲电压脉冲时长和质粒浓度等条件,将载体 为 pCMV6-Entry TRIB3 过表达质粒和 TRIB3 siRNA 转入 RAW264. 7 细胞,24 h 后相差显微镜观察细胞形态, CCK-8法检测细胞存活率,72 h Western Blot 法检测 TRIB3 蛋白表达以验证目的基因表达改变情况。 


结果  (1) 以不同脉冲电压转染时,110 120 mV 组细胞形态和存活率与对照组无差异,130 140 mV 组悬浮细胞较多细胞存活率显著低于对照组(P< 0. 01),120、130 140 mV TRIB3 蛋白表达显著增加(P< 0. 05);(2)以不同脉冲 时长进行转染时,10 20 ms 组细胞形态和存活率与对照组无差异,30 ms 组细胞存活率显著低于对照组(P< 0. 01),20 30 ms TRIB3 蛋白表达显著增加(P< 0. 01);(3)以不同质粒浓度进行转染时,2 4 μg 组细胞形态 和存活率与对照组无差异,6 μg 组细胞存活率低于对照组(P< 0. 05),4 μg TRIB3 表达显著增加(P< 0. 01);(4) 120 mV、20 ms 条件转染不同浓度 TRIB3 siRNA ,各组细胞形态和存活率均与对照组无差异,10 nmol / L TRIB3 表达仅为对照组的 0. 19 ( P< 0. 01)。 


结论 120 mV、20 ms 条件在 RAW264. 7 细胞中电穿孔转染 TRIB3 过表达质粒(每样本 4 μg)TRIB3 siRNA(10 nmol / L),在保证较高的细胞存活率的同时能显著改变目的基 因的蛋白表达水平,为后续 RAW264. 7 细胞中质粒转染相关的基础研究提供实验依据和借鉴


阅读原文:小鼠巨噬细胞 RAW2647 细胞电穿孔转染条件的建立和验证.pdf


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