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如何挑选细胞崽崽的必备口粮—血清篇

2020年06月05日 浏览量: 评论(0) 来源:赛业生物 作者:小赛 责任编辑:admin
摘要:在培养细胞的过程中,你是否遇到:本应贴壁的细胞,某次传代后出现不贴壁了?细胞养不起来,生长速度缓慢,或突然停滞生长?细胞状态不好,视野中总是存在较多死细胞?想要知道如何才能把细胞养好,我们需要先明确培养细胞的3个关键要素:良好的细胞来源,严谨的实验操作,正确的培养体系。关于操作,其中存在许多人为不可控因素,我们后期会另辟专题讨论,今天重点聊下如何正确选择合适的培养体系。

在培养细胞的过程中,你是否遇到:

本应贴壁的细胞,某次传代后出现不贴壁了?

细胞养不起来,生长速度缓慢,或突然停滞生长?

细胞状态不好,视野中总是存在较多死细胞? 

想要知道如何才能把细胞养好,我们需要先明确培养细胞的3个关键要素:良好的细胞来源,严谨的实验操作,正确的培养体系。关于操作,其中存在许多人为不可控因素,我们后期会另辟专题讨论,今天重点聊下如何正确选择合适的培养体系。

细胞的培养体系一般指用于培养细胞的完全培养基,它在培养细胞过程中主要发挥4大功能:提供营养物质、维持细胞稳态、提供物质传递的介质和指示细胞环境,同时也要保证培养基对所培养的细胞不会造成毒害或污染。通常情况下,细胞完全培养基是由基础培养基、细胞因子和血清所组成。 

如何挑选细胞崽崽的必备口粮——血清篇

01 基础培养基

目前市面上可选择的基础培养基种类很多,如常用的DMEM(高糖/低糖)、培养肿瘤细胞的RPMI 1640等。这些基础培养基可满足大部分细胞培养的需求,但在培养某些较为特殊的细胞如干细胞时,培养的效果经常不尽人意,这便需要对培养基的成分进行个性化调整。 

OriCell会通过平行试验,针对不同的细胞尝试多种基础培养基,分析并增减各培养基的成分,甚至将不同种类培养基按不同比例进行调和等多种方式,甄选出最适合细胞培养的基础培养基。 

02 细胞因子

细胞因子则主要为白细胞介素类、生长因子类、肿瘤坏死因子等,发挥促进增殖分化、调节免疫等作用。 

03 胎牛血清

在细胞培养体系中,血清是唯一不属于人工合成的成分,同时也让血清成分成为细胞培养体系中最大的不确定因素,因此,如何选择合适的血清是细胞培养得好坏的决定性因素之一。根据采血时机的不同,牛血清可分为胎牛血清(Fetal Bovine Serum,FBS)、新生牛血清和小牛血清,我们细胞培养中一般使用的是胎牛血清,也是最为“干净”、营养最为丰富的血清。 

胎牛血清是在母牛怀孕3-8个月时,通过胎牛心脏穿刺采血获得新鲜的胎牛全血,经自然层析、离心后收集得到去除血细胞、纤维蛋白等成分的淡黄色透明上清液体,并在生产过程使用多级高置流膜过滤技术和三级0.1µm终端微滤方法处理而获取的血清。相比于新生牛和小牛血清,胎牛血清中所含的抗体、补体等对细胞有伤害的成分最少,因此对于一些较“脆弱”的细胞如干细胞、原代细胞,一定要使用优质的胎牛血清进行培养。 

04 胎牛血清的功能

血清的成分十分复杂,既有协助物质运输的蛋白、营养物质,还有促进细胞生长的激素和因子等,正因为血清这种天然成分的复杂性,使得血清在细胞培养过程中发挥了多种功能:

 提供维持细胞生长的激素,促进所培养细胞的生长;

 弥补基础培养基中没有或含量很少的营养物质;

 提供结合蛋白,促进细胞识别和利用维生素、脂类和其他激素等;

 某些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用;

 促进细胞贴壁,提供可促进细胞铺展在塑料培养基质的因子;

 起酸碱度缓冲液作用;

 提供蛋白酶抑制剂,使细胞消化时残留的胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。 

05 胎牛血清的使用

在细胞培养过程中,胎牛血清的使用浓度一般在5%-10%,有特殊要求的浓度在20%。 

血清对温度比较敏感,不使用时必须保存在-20℃。解冻血清时要预防沉淀发生,不能直接将冷冻的血清放入37℃水浴或者温箱中,因为血清在融化时,蛋白先融而冰块后融,局部蛋白浓度过高易发生沉淀,影响血清质量。 

若发现血清有许多悬浮物,则可将血清加入培养基内一起过滤,勿直接过滤血清,一般情况下不过滤也不会对效果造成影响。血清在解冻后,如果一次无法用完一瓶,可按 40~50mL分装于无菌处理瓶中,再放入-20℃保存,避免反复冻融。

06 胎牛血清使用不当的风险

近年来全球疫情频发,很多都是动物来源的病毒传播,我国对于动物源制品的进口一直有很严格的规定,而对于疫区来源的胎牛血清,同样存在较大的生物学污染风险,比如病毒、支原体、噬菌体污染等。这对于使用血清进行科研的实验操作人员造成了重大的潜在隐患,因此,国内官方对此也有明确的公告:未经检疫的胎牛血清可能携带传染性物质,一旦流入境内,将会对人民群众的生命健康造成重大威胁,如可能带有疯牛病病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛细小病毒、狂犬病毒或其他传染性物质,具有极高的检疫风险。 

此外,不合格的血清对实验的重复性、稳定性和真实性也会造成严重影响。

1)无合格质检的胎牛血清存在支原体、病毒等污染,这对涉及细胞培养的实验结果会造成不良影响;

2)采血工艺不规范导致溶血,溶血较严重的血清含有许多胞内产物,对细胞有刺激作用,影响实验的稳定性和数据的真实性;

3)血清批次不稳定,实验结果难以重复。 

07 如何选择合适的胎牛血清

由于胎牛血清来源的特殊性,这使得选择血清也成为了一门技术活。那么如何来甄别和选择血清呢? 

  • 看产地

受供体饲养环境、生产工艺等因素的影响,原产澳洲、新西兰的血清是目前品质较高的血清来源。虽然北美洲的血清质量也较高,但受疫情及国家进口政策的限制,目前尚无正规渠道购买北美的血清产品。 

  • 看外观

1)颜色:根据血红蛋白含量的不同,胎牛血清可表现出黄色或红色,实际上,血红蛋白含量的高低对血清质量并无直接影响,这个指标的意义在于能体现出采血过程的严谨规范程度。胎牛血清或多或少总有点溶血,因为真正的胎牛血清凝血功能差,红细胞容易破裂。

2)澄清度:高质量的胎牛血清由于蛋白和脂类等物质含量低,表现为稀薄、清淡,而新生牛血清,相对而言更加粘稠,颜色略深。

3)血清沉淀:血清有沉淀,是质量问题?血清中的沉淀是由纤维蛋白的凝聚产生,对血清质量没有任何影响,沉淀的产生原因很多,跟加工生产方式、是否反复冻融密切相关。虽然沉淀并不直接影响血清的质量,但对细胞的显微观察有一定的阻碍。 

  • 看批间差异

采购血清要关注血清的批间差异。经验丰富的供应商会制定严谨的质检标准,确保血清筛选标准的一致性,尽可能降低血清的批间差异,尽可能消除因采血、生产、贮藏工艺不同而造成的批间差异。 

最后,适合自己细胞生长的才是最好的。 

08 胎牛血清有哪些重要的技术性指标?

1)内毒素:标准为不高于10EU/mL。内毒素是细菌破碎后细胞壁的成分,因此内毒素含量的高低可表现出采血到生产一系列过程中的无菌操作情况。

2)总蛋白含量:胎牛血清总蛋白含量一般范围是30-50mg/mL,数值偏高,说明采血的牛龄偏大,不是胎牛,数值偏低,表明血清可能掺水了。

3)血红蛋白:标准为不高于30mg/dl,颜色越红,数值越高。

4)pH:7.0~8.0。

5)微生物:包括细菌、霉菌、支原体、噬菌体、各类病原性病毒等。

6)免疫球蛋白(IgG):免疫球蛋白的数值能完全体现出采血时的牛龄情况,新生牛的血清中容易产生IgM,IgG的含量也偏高,进口胎牛血清不含IgM,另外IgG的含量也较低。 

面对市面上琳琅满目的血清产品,如果您不知道如何选择的话,推荐您选择赛业生物OriCell系列胎牛血清: 

1. 赛业生物血清贸易部门拥有十多年血清全球贸易经验,熟知全球血源,拥有全球优质血清进口渠道。我们不是血清的生产商,我们只是优质血清的搬运工

2. 赛业生物细胞生物学团队拥有十多年血清筛选经验,基于自筛血清生产的细胞培养基已畅销全球十多年。我们制定有一套完善严谨的胎牛血清筛选标准。每批胎牛血清均采用多种细胞测试胎牛血清的性能与质量,甄选在细胞形态、增殖速度、克隆形成能力、内毒素、免疫球蛋白等检测项目中均表现优秀的血清。

3. OriCell系列胎牛血清均有完整的海关进出口资质,每个批次均具有完整的检验报告,确保产品安全可追溯。 

OriCell系列胎牛血清

OriCell特级胎牛血清源自澳洲,血清经过多道分离、纯化、过滤工艺,质地纯净,内毒素及其他免疫原性蛋白含量极低,适合各类细胞,特别是干细胞、原代细胞等各种血清依赖度高的细胞(如胚胎干细胞、骨髓间充质干细胞和星形胶质细胞等)的取材、培养,及其他各类对血清质量有较高要求的实验研究。 

关于OriCell®

OriCell是赛业生物旗下致力于干细胞试剂及干细胞技术服务的子品牌,作为拥有14年历史的科研干细胞供应商,OriCell旗下拥有规模庞大、品种齐全的科研干细胞库。自主开发了百余种干细胞及原代细胞产品,独立起草的数十种科研干细胞标准更已成为国际主要参考的干细胞技术标准。OriCell干细胞及相关培养基已服务数万客户,获得了市场占有率和满意度的双赢。OriCell提供的干细胞诱导分化服务、细胞基因编辑服务与稳转细胞株构建服务已帮数千名科研人员解决了科研难题,产品与技术已直接应用于包括CNS(Cell, Nature, Science)三大期刊在内的3600余篇学术论文。如有需要,欢迎后台留言或者联系我们咨询

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