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长爪沙鼠CST3序列同源性分析及蛋白体外表达

2020年08月10日 浏览量: 评论(0) 来源:实验动物科学2019年第2期 作者:王妍 郭萌 杜小燕 李长龙 路静 霍学云 吕建祎 刘欣 陈振文 责任编辑:admin
摘要:分析长爪沙鼠半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cystatin C,CST3)cDNA序列同源性,并建立CST3蛋白原核表达体系,为长爪沙鼠CST3抗体制备和后续基因功能研究奠定基础。

目的    分析长爪沙鼠半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cystatin C,CST3)cDNA序列同源性,并建立CST3蛋白原核表达体系,为长爪沙鼠CST3抗体制备和后续基因功能研究奠定基础。


方法    对长爪沙鼠Cst3 cDNA序列进行克隆、同源性分析及密码子优化;将优化后序列酶切连接到pET28a载体,完成重组CST3蛋白表达载体构建;将该载体转化到感受态细胞中,通过异丙基硫代半乳糖苷(lsopropyl β-D-Thiogalactoside,IPTG)诱导实现CST3蛋白的原核表达,并用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blotting)验证。


结果    长爪沙鼠Cst3 基因与人和小鼠Cst3基因的序列同源性较低。密码子优化后的长爪沙鼠Cst3 表达序列插入到pET28a质粒中,获得了CST3蛋白表达载体。经I mmol/L IPTG 37℃诱导12h,可获得大量CST3蛋白。


结论    成功地构建了长爪沙鼠 CST3 蛋白的体外表达体系。


阅读原文:长爪沙鼠CST3序列同源性分析及蛋白体外表达.pdf


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