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不同小鼠肝炎病毒对ELISA方法检测其血清抗体的影响

2020年09月14日 浏览量: 评论(0) 来源:实验动物科学2019年第6期 作者:吴朋朋 白冰 张彩勤 赵勇 苗海港 师长宏 责任编辑:admin
摘要:建立小鼠肝炎病毒(Mouse Hepatitis Virus,MHV)血清抗体ELISA检测方法,用于本地区MHV的日常监测,以便对SPF小鼠感染状况及时作出判断。


目的 建立小鼠肝炎病毒(Mouse Hepatitis Virus,MHV)血清抗体ELISA检测方法,用于本地区MHV的日常监测,以便对SPF小鼠感染状况及时作出判断。


方法 选取3种MHV毒株MHV1、MHV-JHM和MHV-A59,通过L929 细胞扩增培养获得纯化浓缩抗原并筛选适合包被抗原类型;免疫BALB/C小鼠,获得高效价免疫阳性血清;优化ELISA反应体系建立规范化的ELISA试剂盒并用于临床小鼠血清样品的检测。


结果 筛选出适合本地区的MHV包被抗原类型为MHV1,建立了病毒扩增及浓缩纯化方法,制备的MHV抗血清达到同批次大量高滴度的水平,可作为标准化质控血清。包被抗原、待检血清和酶结合物最佳工作浓度分别为4.0 μg/mL(10-7.73/0.1 mL TCID50)、1∶40和1∶4000稀释;批次内和批次间平均变异系数分别为5.13%和5.57%;检测灵敏度为1∶4000稀释;与小鼠仙台病毒(SV)、小鼠肺炎病毒(PVM)、呼肠孤病毒Ⅲ型(Reo3)、小鼠细小病毒(MVM)和鼠痘病毒(Ect)阳性血清均无交叉反应。稳定性试验相对偏差小于10%。对165份血清样品进行检测,阳性血清相符率97.37%(37/38),阴性血清相符率92.19%(118/127)。


结论  本研究建立的ELISA方法检测小鼠血清MHV抗体具有较高的特异性、敏感性和结果可重复性,,可以用于本地区MHV日常病原学监测,以便对小鼠感染状况作出准确判断。


阅读原文:不同小鼠肝炎病毒对ELISA方法检测其血清抗体的影响.pdf

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