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GST提高洗脱效率小贴士

GST提高洗脱效率小贴士

卡梅德生物科技(天津)有限公司位于天津市的西北部-武清区,是集高端生物科研试剂的研发、生产、销售为一体的综合性创新技术应用企业。公司专注于重组蛋白、抗体等多种自主技术平台建设,旨在为客户提供高质量的实验外包服务(CRO服务),包括重组蛋白表达与纯化,重组抗体制备,天然蛋白分离与纯化,常规基因工程实验操作,病毒分离培养等免疫学相关技术服务;公司研发了众多用于科学研究的重组蛋白、抗体、抗体药物靶点蛋白、工业酶、诊断原料等相关产品。我们也可为工业客户提供部分IVD级别抗体和抗原原料。 更多内容>>

      GST(谷胱甘肽巯基转移酶)能特异的与谷胱甘肽结合,表现为酶和底物的作用原理。利用这个原理,将GST做成标签表达出融合蛋白,与带谷胱甘肽配基的亲和介质特异性结合,从而纯化出目标蛋白,再用特异性的酶将GST标签切除而最终得到天然蛋白。

       GST融合蛋白纯化的特点有:纯度高、纯化条件温和、保持蛋白活性、促进蛋白可溶性表达,且该标签可以被切除。

      而在纯化过程中偶尔也会遇到一些常见问题,下面就针对GST标签蛋白纯化中常遇到的问题——GST标签蛋白不能被高效的洗脱, 进行梳理和解答。

可能的原因1:

洗脱缓冲液的体积或者洗脱时间不够。
建议
增加洗脱缓冲液的体积。有些情况下,尤其是柱上酶切标签蛋白时,需要更大体积的缓冲液来洗脱标签蛋白。或通过降低洗脱过程中的流速来增加洗脱时间。对于离心方法,可以尝试降低洗脱过程中的离心速度。

可能的原因2:

洗脱缓冲液的pH过低。
建议:
增加洗脱缓冲液的pH值:将pH增加到8-9会增强洗脱而不用提高洗脱所用谷胱甘肽的浓度。

可能的原因3:

洗脱缓冲液的pH过低。
建议:
增加洗脱缓冲液的pH值:将pH增加到8-9会增强洗脱而不用提高洗脱所用谷胱甘肽的浓度。

可能的原因4:

洗脱缓冲液的离子强度过低。
建议:
增加洗脱缓冲液中的离子强度,在洗脱缓冲液中加入0.1-0.2M的氯化钠也可能会使结果变好。

可能的原因5:

非特异的疏水相互作用导致蛋白和柱材非特异的结合或聚集,从而阻止了标签蛋白的溶解和洗脱。
建议:
向洗脱缓冲液中加入非离子去垢剂。加入1%的TritonX-100或2%的n-octylglucoside可以显著提高某些GST标签蛋白的洗脱。

可能的原因6:

洗脱缓冲液中的谷胱甘肽被氧化了。
建议:
使用新鲜的洗脱缓冲液;加入DTT。



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