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模型制备

隐球菌感染的实验性糖尿病动物模型

2021年02月23日 浏览量: 评论(0) 来源:《常见人类疾病动物模型的制备方法》 作者:秦川 责任编辑:yjcadmin

【操作步骤】选体重200~250g的大鼠,饲喂固型饲料。从隐球菌感染的患者的脊髓液或尿中采取菌种,进行传代培养,培养的代数越多隐球菌的荚膜越厚,毒性也越强。37℃,甘露醇琼脂培养液中对隐球菌进行培养至对数生长期,用生理盐水50倍稀释,由鼠尾静脉注射0.5ml,立即向腹腔内注射道诺霉素0.4mg/kg体重,这种方法能使隐球菌很容易地在动物体内存活并增殖。也可预先将道诺霉素0.4mg/kg体重注入动物腹腔,7~15d后,用戊巴比妥钠50mg/kg体重麻醉大鼠,打开腹腔,由肝总动脉注入50倍稀释的隐球菌0.1~0.3ml,用手指压迫肝动脉,防止菌液流入肝脏,注射完毕缝合腹腔,精心护理,提高存活率。

【结果分析】用道诺霉素对大鼠进行前期处理后,由尾静脉注入隐球菌,7d后动物食欲开始减退,瘦弱,体毛粗、硬度增加,并失去活力。15d后静脉注射葡萄糖(0.5g/kg)进行耐糖试验,结果见实验组的动物耐糖能力比对照组的正常动物低,对胰岛素的反应也减弱。耐糖试验及病理取材,观察隐球菌在体内的存在部位,可观察到:①胰脏的外分泌部只存有极少量的隐球菌,胰岛内或其周围组织却附着有很多的隐球菌。隐球菌易于附着的部位主要是胰岛的网状组织,但也可能附着于胰岛一腺泡等部位。附着于这些部位的隐球菌直径为3.5~4.6μm,比附着在人红细胞的隐球菌要小,目前对这种现象还难以解释。胰岛内的隐球菌四周可见有淋巴细胞、单核细胞浸润,呈现出纤维性增殖现象,内分泌细胞变性、坏死,出现肉芽肿。②肺组织中通常由10~15个隐球菌形成一个集落,呈慢性肺炎样变化。③肝小叶内可见有极少的隐球菌,细菌的四周也像在胰岛内那样,出现淋巴细胞等炎性细胞浸润,往往伴有肝细胞坏死。④肾组织中隐球菌主要附着于肾小管腔。

从大鼠的尾静脉注射的隐球菌会随血流分散到多个脏器中,不易引起胰岛特异性的炎症,因此,可对大鼠实施开腹手术,用手指压迫肝动脉,由肝总动脉注射隐球菌,使胰岛出现损害。结果在肝、肾、肺等脏器中几乎见不到隐球菌,大部分隐球菌向胰腺外分泌部扩散。因此,经肝总动脉注射隐球菌时,需要以缓慢的速度注射,把压力限制在最小的程度。

【注意事项】

(1)注射隐球菌后,要用塑料布覆盖饲育箱底部,动物的排泄物(主要是尿液)要随塑料布一起烧掉,用具要彻底杀菌消毒。

(2)隐球菌的培养最好用甘露醇琼脂培养液,培养温度为37℃。培养出来的细菌可能大小不一,5~30μm大小的都有,一般为5~10μm。本菌可用其产生的尿素酶来鉴定。


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