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western-blot实验注意事项

·滤纸、胶、膜之间的大小,一般是滤纸>=膜>=胶。
·滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡,气泡会造成短路。
·因为DEPF膜的疏水性,膜必须首先在甲醇中完全浸湿。而且在以后的操作中,膜也必须随时保持湿润(干膜法除外)。
·滤纸可以重复利用,上层滤纸(靠膜)内吸附有很多转移透过的蛋白质,所以上下滤纸一定不能弄混,在不能分辨的情况下,可以将靠胶滤纸换新的。
·转移时间一般为1.5 小时,( 1mA-2mA/cm2,10% gel),可根据分子量大小调整转移时间和电流大小。
·灌胶时尽量均匀,否则可能会出现气泡。
·为避免出现信号低的情况,最好选用高灵敏度的发光液,如enlight发光液等。
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