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抗体配对-ELISA定制开发

抗体配对-ELISA定制开发

卡梅德生物能够为客户提供基于GMP指导规则的项目特异性的抗体筛选与配对服务。
 

抗体配对服务-ELISA酶联免疫试剂盒开发

ELISA (酶联免疫吸附反应) 是一种基于固相载体的中高通量筛选技术,被广泛应用于定性,定量检测样品中多肽,蛋白,抗体和激素的含量。在ELISA实验中,抗体或者抗原需提前预结合到酶标板(96孔板)中,再利用辣根过氧化物酶(HRP),碱性磷脂酶(AP)或者其他化学发光基团标记的抗体或者抗原进行显色反应。 如图1所示,ELISA方法主要有四种:ELISA夹心法、竞争法(测定抗原),间接法(测定抗体)或竞争法(测定小分子化合物),后三者较为常用。

ELISA酶联免疫试剂盒的开发工作主要涉及到抗体对的筛选,抗体的性能好坏,识别位点的差异性直接决定了后期ELISA试剂盒的质量好坏。抗体配对成功后,需要验证的工作包括试剂盒的检测灵敏度,线性范围,重复性,特异性和热稳定性。

服务内容及产品:

*项目评估与实验方案设计

*抗体的质量评价:抗体浓度(BCA法或Lowery法测定),抗体效价(需客户提供抗原)

*抗体配对方阵筛选报告(含N/P值)

*检测灵敏度验证报告

*线性范围验证报告

*重复性验证报告

*特异性报告

*热稳定性(37 ℃或25 ℃热稳定性)报告

*成型试剂盒及批间一致性数据

案例开发:


体外筛选某抗体,固定抗原起始浓度后,进行抗体方阵初步配对:

OD450读数

包被/检测抗体浓度

1:1000

1:2000

1:4000

1:8000

1:16000

1:32000

阴性对照

样品

阴性对照

样品

阴性对照

样品

阴性对照

样品

阴性对照

样品

阴性对照

样品

A

1:500

0.348

2.925

0.193

2.730

0.148

2.348

0.099

1.787

0.066

1.108

0.056

0.700

B

1:1000

0.206

2.571

0.130

1.972

0.089

1.728

0.068

1.242

0.050

0.659

0.042

0.582

C

1:2000

0.183

2.579

0.122

2.253

0.085

1.807

0.060

1.432

0.045

0.897

0.036

0.715

D

1:4000

0.174

0.918

0.089

1.083

0.065

0.695

0.052

0.583

0.042

0.511

0.031

0.304

E

1:8000

0.159

0.269

0.076

0.185

0.059

0.147

0.053

0.103

0.035

0.074

0.029

0.059

F

1:16000

0.275

0.132

0.073

0.108

0.052

0.074

0.050

0.057

0.033

0.045

0.033

0.044

G

1:32000

0.216

0.107

0.069

0.102

0.051

0.050

0.036

0.043

0.032

0.035

0.025

0.038

H

1:64000

0.119

0.112

0.079

0.069

0.048

0.044

0.022

0.032

0.021

0.020

0.008

0.022

选择1:2000 – 1:8000抗体浓度范围进行抗体配对后,筛选出最优P/N值(样品比对照值)进行ELISA试剂盒线性建立(线性拟合法)。(更多实验结果未展出)

 

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