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骨形态发生蛋白9基因敲除小鼠的构建

2019年07月04日 浏览量: 评论(0) 来源:中国实验动物学报2019年第3期 作者:周珂 辛智倩 刘佩娟 马翠 师长宏 王华 张海 责任编辑:admin
摘要:运用CRISR/Cas9技术敲除小鼠基因组中 Bmp9基因片段,构建 Bmp9基因敲除小鼠。 方法 根据 Bmp9基因的外显子序列,设计一段sgRNA并合成。 sgRNA体外转录后和Cas9mRNA混合后显微注射受精卵 细胞,注射后的受精卵细胞移植至受体动物获得子代小鼠。 提取子代小鼠基因组DNA测序鉴定其基因型。 基因 型鉴定正确的小鼠与野生型交配后筛选纯合子小鼠。 同时取纯合子小鼠心脏、肝、脾、肺、肾,匀浆后提取总RNA 和总蛋白,通过qPCR、WB和免疫组化检测BMP9在各组织中的表达。

目的:运用CRISR/Cas9技术敲除小鼠基因组中 Bmp9基因片段,构建 Bmp9基因敲除小鼠。 方法 根据 Bmp9基因的外显子序列,设计一段sgRNA并合成。 sgRNA体外转录后和Cas9mRNA混合后显微注射受精卵 细胞,注射后的受精卵细胞移植至受体动物获得子代小鼠。 提取子代小鼠基因组DNA测序鉴定其基因型。 基因 型鉴定正确的小鼠与野生型交配后筛选纯合子小鼠。 同时取纯合子小鼠心脏、肝、脾、肺、肾,匀浆后提取总RNA 和总蛋白,通过qPCR、WB和免疫组化检测BMP9在各组织中的表达。

结果:设计并合成20bp的sgRNA并进行 体外转录,显微注射并回植后得到基因突变小鼠,连续交配后得F2代纯合子。 测序结果显示,突变小鼠存在两种 基因型,一种为5bp缺失突变,另一种为13bp缺失并伴有1bp插入突变。 与野生型C57BL/6相比,qPCR、WB和 免疫组化结果均表明基因敲除小鼠肝中BMP9表达显著降低。

结论:利用CRISPR/Cas9技术成功构建出了BMP9 基因敲除小鼠。

全文阅读:骨形态发生蛋白9基因敲除小鼠的构建

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